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代碼： PEL-4EBP1-T36-1

人/小鼠Phospho-4E-BP1（T36）ELISA

RayBio ®人/小鼠磷酸化4E-BP1（T36）ELISA試劑盒。該測定法半定量測量裂解物樣品中的磷酸化4E-BP1（Thr36）。

抗原信息

入藏號：

• Q13541

基因ID：

• 1978年

基因符號：

• EIF4EBP1

蛋白質(zhì)名稱和同義詞：

真核翻譯起始因子4E結(jié)合蛋白1（4E-BP1）（eIF4E結(jié)合蛋白1）（由胰島素1調(diào)節(jié)的磷酸化熱和酸穩(wěn)定蛋白）（PHAS-I）

分析格式

途徑：

• AMPK信令
• PI3K-AKT信號
• 翻譯

特異性：

該試劑盒中提供的抗體對識別在蘇氨酸-36位點磷酸化的人和小鼠4E-BP1。

檢測到的目標(biāo)數(shù)量：

1

物種檢測：

• 人的
• 老鼠

兼容的樣品類型：

• 細(xì)胞裂解物
• 組織裂解液

設(shè)計原則：

• 三明治為主

檢測方法：

比色

定量/半定量：

半定量

堅實的支持：

96孔微孔板

產(chǎn)品規(guī)格

尺寸：

1,2或5 x 96孔帶微孔板套件

介紹

RayBio®Phospho-4E-BP1（Thr36）ELISA試劑盒是一種非常快速，方便和靈敏的檢測試劑盒，可以監(jiān)測人和小鼠細(xì)胞裂解液中重要生物途徑的激活或功能。通過測定實驗?zāi)Ｐ拖到y(tǒng)中的4E-BP1蛋白，您可以驗證細(xì)胞裂解液中的途徑激活。您可以同時測量多種不同的細(xì)胞裂解物，而無需花費太多時間和精力進行Western Blotting分析。

該夾心ELISA試劑盒是用于測量人和小鼠磷酸-4E-BP1的體外酶聯(lián)免疫吸附測定法。將抗泛4E-BP1抗體包被在96孔板上。將樣品移液到孔中，樣品中存在的4E-BP1通過固定化抗體與孔結(jié)合。洗滌孔并用兔抗-4E-BP1（Thr36）抗體檢測磷酸化的4E-BP1。洗去未結(jié)合的抗體后，將HRP-綴合的抗兔IgG移液到孔中。再次洗滌孔，將TMB底物溶液加入孔中，并且顏色與結(jié)合的4E-BP1（Thr36）的量成比例地發(fā)展。Stop Solution將顏色從藍(lán)色變?yōu)辄S色，并且在450nm處測量顏色的強度。

產(chǎn)品功能

• 快速測量裂解物中的磷酸化蛋白質(zhì)
• 篩選多種不同的細(xì)胞裂解物，無需進行蛋白質(zhì)印跡分析
• 小的動手時間，方便和非放射性材料

應(yīng)用筆記

套件組件

• 預(yù)涂96孔帶微孔板
• 洗滌緩沖液
• 抗磷酸抗體
• HRP-綴合的二抗
• Assay Diluent
• TMB一步法基質(zhì)
• 停止解決方案
• 裂解緩沖液
• 陽性對照樣品

需要其他材料

• 蒸餾水或去離子水
• 100毫升和1升量筒
• 管準(zhǔn)備樣品稀釋液
• 蛋白酶和磷酸酶抑制劑
• 精密移液器可輸送2μl至1 ml體積
• 可調(diào)節(jié)的1-25毫升移液器，用于試劑制備
• 臺式搖桿或振動篩
• 微孔板讀數(shù)器能夠測量450nm處的吸光度

協(xié)議大綱

• 按照手冊中的說明準(zhǔn)備所有試劑和樣品。
• 每孔加入100μl樣品或陽性對照。
• 在室溫下孵育2.5小時或在4°C下孵育O / N.
• 向每個孔中加入100μl制備的抗體。
• 在室溫下孵育1小時。
• 向每個孔中加入100μl制備的1X HRP-鏈霉抗生物素蛋白。
• 在室溫下孵育1小時。
• 每孔加入100μlTMB一步法底物試劑。
• 在室溫下孵育30分鐘。
• 每孔加入50μl終止液。
• 立即讀取450 nm。

典型數(shù)據(jù)

積極控制

用FBS處理HeLa細(xì)胞。在Cell Lysate Buffer中以4 x 10 7個細(xì)胞/ ml 溶解細(xì)胞。在該ELISA中分析裂解物的系列稀釋液。有關(guān)詳細(xì)信息，請參見第VI部分試劑準(zhǔn)備步驟3。

胰島素刺激293細(xì)胞系

用胰島素處理或未處理293細(xì)胞。使用該phosphoELISA和Western印跡分析細(xì)胞裂解物。

存儲/穩(wěn)定性

收到后，試劑盒應(yīng)儲存在-20°C。請在發(fā)貨之日起6個月內(nèi)使用。初次使用后，洗滌緩沖液濃縮液（項目B），分析稀釋劑（項目E），TMB一步法底物試劑（項目H），終止溶液（項目I）和細(xì)胞裂解液緩沖液（項目J）應(yīng)儲存在4° C避免反復(fù)凍融循環(huán)。將未使用的孔返回含有干燥劑包的袋中，沿整個邊緣重新密封，并儲存在-20°C。項目D，在2-8°C下儲存長達(dá)一個月（在-20°C下儲存長達(dá)6個月，避免反復(fù)凍融循環(huán)）。重構(gòu)的陽性對照（項目K）應(yīng)儲存在-70°C。

用法

本產(chǎn)品僅供實驗室研究使用。
不用于診斷或治療用途。