Celltechgen CTG-MGD4766說明書

Celltechgen CTG-MGD4766說明書

Detect Kit

· Model: CTG-MGD4766

細節(jié)：

- 檢測套件

貨號：CTG-MGD4766

試劑盒組分：

2毫升單克隆抗體 - ，R-PE共軛。

2毫升Anti-R-PE磁珠。

1 ml Bead釋放試劑和1 ml Stop Buffer（可選）

描述

該套件用于隔離和檢測 - ？使用磁珠磁性標記的細胞。首先，通過與R-PE和抗R-PE磁珠綴合的單克隆抗體標記細胞，在磁柱上正選擇- ⁺細胞，收集用于進一步的流式細胞術分析。珠子釋放試劑和終止緩沖劑可用于從磁珠中釋放具有抗體-R-PE的細胞。

目標特征

符號： -

基因編號：729816

Uniprot條目：Q04683

蛋白質(zhì)名稱：CXC趨化因子受體5型（CXC-R5）（CXCR-5）（伯基特淋巴瘤受體1同源物）（CD抗原CD185）       

生物：Mus musculus（Mouse）

目標功能

容量        

1 X 10 ^9個細胞

公式  

所有組分均以含有穩(wěn)定劑和0.05％sodium azide的緩沖液供應。

存儲和使用      

在2-8°C的溫度下避光保存。不要凍結(jié)。到期日期顯示在樣品瓶標簽上。該產(chǎn)品僅供研究使用，不適用于診斷程序。

一般議定書

開發(fā)檢測試劑盒以用特異性抗原分離和檢測靶細胞。篩選程序通過用針對特異性抗原的單克隆抗體直接磁性標記細胞，與R-PE和抗R-PE磁珠綴合，然后將標記的細胞保留在磁柱上，并且靶細胞釋放并收集用于進一步的流式細胞術分析。

1.樣品制備

· 當使用抗凝外周血或血沉棕黃層時，應通過密度梯度離心分離外周血單核細胞（PBMC）。

· 為了在密度梯度分離后除去血小板，將細胞沉淀重懸于緩沖液中，并在20℃下以200×g離心10-15分鐘。小心吸出上清液。重復洗滌步驟。

· 使用組織或裂解的血液時，使用標準方法制備單細胞懸液。

· 死細胞可以非特異性結(jié)合磁珠。為了去除死細胞，我們建議使用密度梯度離心或死細胞去除試劑盒。

· 保持細胞冷卻，并使用預先冷卻的溶液。

2.磁性標簽

· 以下給出的磁性標簽卷多可達10個？總細胞。工作時少于10？細胞，使用與指示相同的體積。使用較高的細胞數(shù)時，相應地擴大所有試劑體積和總體積。

· 應滴定初級染料綴合的抗體以確定宜染色稀釋度。染色不應該增加陰性群體的熒光強度。

1）     計算細胞數(shù)量。

2）     以300×g離心細胞懸浮液10分鐘。*吸出上清液。

3）     每10 ^7個總細胞在80μL緩沖液中重懸細胞沉淀。

4）     加入20μl初級PE-綴合的抗體并充分混合，在2-8℃黑暗中孵育10分鐘。

5）     每10小時加入1-2 mL緩沖液，清洗細胞以去除未結(jié)合的一抗。將細胞以300×g離心10分鐘。

6）     *吸出上清液，每10 ^7個總細胞將細胞重懸于80μL緩沖液中。

7）     每10加入20μL抗PE磁珠？總細胞。

9）充分混合，在2-8℃下孵育15分鐘。

10）每10升加入1-2 mL緩沖液洗滌細胞。將細胞以300×g離心10分鐘，*吸出上清液。

11）重新懸掛10？細胞在500μL緩沖液中。注意：對于更高的單元格數(shù)，請相應地擴大緩沖區(qū)容量。

12）繼續(xù)進行磁力分離。

3.用于檢測的靶細胞的陽性選擇

1）將色譜柱放在合適的分離器的磁場中。 

2）用適量緩沖液沖洗，準備色譜柱。

3）將細胞懸浮液施加到柱上。

4）收集未標記的細胞，用適量的緩沖液通過并洗滌柱子。執(zhí)行洗滌步驟三次。          

5）從分離器中取出色譜柱并將其放在合適的收集管上。

6）移取適量的緩沖液到柱上并釋放靶細胞用于進一步的流式細胞術分析。

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