bioacademia 02-701說明書

該cDNA文庫（質粒DNA）是由啤酒酵母S288C衍生的poly（A）+ RNA在對數期通過Linker-Primer方法（參考文獻1）由大阪H. Nojima教授構建的。大學。通過使用寡核苷酸（dT）18接頭引物單向克隆該文庫，該引物包含Not I和BamHI（Bgl II）-Sma I銜接子的限制性酶切位點。
該文庫中使用的pLZ3載體（如下所示）不能在啤酒酵母中復制，但包含pUCori以便在大腸桿菌中復制。

應用
已知或未知基因的PCR篩選：準備已知或未知基因（cDNA）的引物并擴增通過從該文庫中PCR克隆該基因，然后克隆至合適的載體。
標準擴增條件：以10-100 ng cDNA為模板，進行35個PCR反應循環。（根據目標基因的mRNA的表達率來改變模板的數量和循環數。）

規格
數量：在10 mM Tris-HCl-1mM EDTA（pH 7.5）中，500 ng（40 ng / ul 13ul）
質量：1）獨立克隆的數量：3.6 x 106 
2）平均插入片段大小：大于1 kb
存儲：-20℃

參考文獻
1. KoboriM。池田 奈良 加藤 久米川 野島 和川島 “通過改進的方法大規模分離破骨細胞特異性基因，涉及制備減法cDNA文庫。” Genes Cells 3：459-475（1998）PMID：9753427
2.田中S。和野島 “ Nik1：釀酒酵母的Nim1樣蛋白激酶與Cdc28復合物相互作用并調節細胞周期進程。” Genes Cells 1 905-921（1996）PMID：9077450 
3. SambrookJ。和RussellDW。分子克隆第11章“ cDNA文庫的制備和基因鑒定”。CSHL出版社（2001）