westbioscience大腸桿菌系統(tǒng)的優(yōu)缺點

所有West Bioscience定制的蛋白表達和純化均在我們的加利福尼亞工廠進行，以確保高的質(zhì)量和的客戶滿意度。我們一直是提供高質(zhì)量重組蛋白表達和純化服務(wù)的，尤其是在定制蛋白設(shè)計領(lǐng)域。我們向客戶交付了數(shù)千種蛋白質(zhì)。

 westbioscience大腸桿菌系統(tǒng)的優(yōu)缺點

 優(yōu)點

• 表達水平可能很高
• 低成本
• 快速增長
• 可擴展
• 簡單的轉(zhuǎn)換協(xié)議
• 可以更改許多參數(shù)以優(yōu)化表達式

 缺點

• 低效的二硫鍵形成
• 蛋白在細胞質(zhì)中折疊不良
• 包涵體形成
• 體外重折疊方案效率低下–可能會抵消優(yōu)勢
• 密碼子的用法不同于真核生物
• 少的翻譯后修飾
• 內(nèi)毒素

克隆

我們將通過標準亞克隆或PCR克隆將您的插入片段克隆到表達載體中。  將用于將目的基因轉(zhuǎn)移到表達載體中。將對克隆進行*排序以進行驗證。

 表達篩選

含有目的基因的表達載體將被轉(zhuǎn)化到大腸桿菌的表達菌株中以產(chǎn)生蛋白質(zhì)。幾個單獨的克隆將在小規(guī)模的誘導(dǎo)實驗中進行篩選。表達結(jié)果將通過SDS / PAGE和蛋白質(zhì)印跡進行分析。

 表達優(yōu)化

表達條件將通過誘導(dǎo)時間，溫度和培養(yǎng)基條件來優(yōu)化。結(jié)果將通過SDS-PAGE和Western blot確認。

 蛋白質(zhì)表征

將測試小規(guī)模的培養(yǎng)物，并對表達的蛋白質(zhì)進行表征，以區(qū)分純化標簽的細胞位置，溶解度，產(chǎn)量和可及性。將設(shè)計生產(chǎn)和純化蛋白質(zhì)的詳細策略。

 蛋白質(zhì)生產(chǎn)

使用搖瓶將以升量進行大規(guī)模生產(chǎn)。如果您喜歡自己純化蛋白質(zhì)，則將收到細胞沉淀物以及帶有SDS-PAGE和Western blot分析結(jié)果的完整報告。

 蛋白質(zhì)純化

可以使用多種方法純化蛋白質(zhì)，例如包涵體制備或親和柱純化。