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    重組豬源RNase抑制劑說(shuō)明書(shū)

    更新時(shí)間:2023-04-21      點(diǎn)擊次數(shù):1474

    重組豬源RNase抑制劑說(shuō)明書(shū)

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    產(chǎn)品詳情

    貨號(hào)

    規(guī)格

    價(jià)格

    78BAB10003-100uL

    100uL(4KU)

    200.00

    78BAB10003-1ml

    1ml (40KU)

    1600.00

    78BAB10003-50ml

    50ml (2MU)

    50000.00

    產(chǎn)品描述

    本產(chǎn)品是以大腸桿菌中進(jìn)行表達(dá),并通過(guò)親和層析純化的重組豬源RNase抑制劑,該蛋白特征與豬肝和人胎盤(pán)來(lái)源此類酶相似,可替代天然提取 RNase Inhibitor的應(yīng)用。本產(chǎn)品與RNase A形成1: 1復(fù)合體,抑制RNase活性。該反應(yīng)是可逆的,通過(guò)尿素及巰基類試劑能夠解離復(fù)合體,使RNase復(fù)性而抑制劑不可逆失活。本產(chǎn)品與其它競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑(核酸類,無(wú)機(jī)磷酸類)不同,可以很容易地通過(guò)苯酚處理將其從反應(yīng)體系中除去,但不能抑制逆轉(zhuǎn)錄酶的RNase H的活性。使用時(shí)可直接加入含有RNA的反應(yīng)液中用于cDNA第一鏈合成、體外轉(zhuǎn)錄和體外翻譯等實(shí)驗(yàn)。

    產(chǎn)品特點(diǎn)

    ·     cDNA合成

    ·      體外轉(zhuǎn)錄

    ·      體外翻譯

    ·      1-Step RT-qPCR

    產(chǎn)品組分

    緩沖液成分:20 mM HEPES-KOH(pH 7.6),50mM KCl,8mM DTT,50% (v/v) glycerol。

    使用方法

    使用方法

    溫馨提示:需要用無(wú)RNA酶的PCR管中配制RNA/引物預(yù)混液

    1 cDNA合成

    (1)在無(wú)RNA酶的PCR管中配制RNA/引物預(yù)混液

    組分

    反應(yīng)體積(10ul)

    Oligo(dT)20

    (或Random primer)

    (或基因特異引物)

    25pmoles

    (25pmoles)

    (5pmoles)

    10mM dNTPs

    2µL

    模板RNA

    2pg-5µg

    DNase/Rnase Free Water

    10ul

    2)65℃加熱5min,立即置于冰上

    組分

    反應(yīng)體積(10ul)

    RNA引物預(yù)混液

    10ul

    5x RT Buffer

    4µL

    BIOHUB Reverse Transcritase

    1ul

    RNase inhibitor(40U/µL)

    1ul

    100mM DTT

    2ul

    DNase/Rnase Free Water

    補(bǔ)足20ul

    3)輕輕混勻,按如下反應(yīng)條件設(shè)置

    逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)條件

    1

    42℃

    20-60min

    2

    99℃

    5min

    備注:逆轉(zhuǎn)錄溫度可在42-60之間調(diào)整,反應(yīng)時(shí)間建議在20-60min內(nèi)調(diào)整

     

    4)得到的cDNA溶液可以直接用于第二鏈cDNA合成及后續(xù)PCR反應(yīng)。

    優(yōu)化參考方法

    優(yōu)化參數(shù)

    參考范圍

    逆轉(zhuǎn)錄

    50-60℃ 5-15min

    預(yù)變性溫度時(shí)間

    95-98℃ 10sec-5min

    變性溫度

    95-98℃ 3sec-10sec

    延伸/退火溫度

    60-65℃ 5sec-30sec

    注意事項(xiàng)

    1. 本產(chǎn)品在PH7?8時(shí)表現(xiàn)最佳抑制RNase活性。

    2. 本產(chǎn)品發(fā)揮活性作用至少添加1 mM的DTT。

    3. 本產(chǎn)品不抑制RNase H活性及逆轉(zhuǎn)錄酶活性。

    運(yùn)輸及保存方法

    -20℃可保存12個(gè)月。



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