緩沖液如何配制

1包被緩沖液，

（1）碳酸鹽緩沖液（PH9.6 +0.2  0.05M） 《激素酶免疫測定技術》石老師編著

　          Na₂CO₃1.59g

　　　　　　NaHCO₃　       2.93g

加蒸餾水至1000ml。

（2）tris緩沖液（0.05mol/L）50ml 0.1mol/L

（Tris）溶液與x ml 0.1mol/L 鹽酸混勻后，加水稀釋至100ml        《酶免疫測定技術》楊立國等編著

某一特定pH值的0.05mol/L Tris緩沖液的配制：將50ml 0.1mol/L Tris堿溶液與上表所示相應體積（單位：ml）的0.1ml/L HCl混合，加水將體積調至100ml

3）0.02mol/L磷酸鹽緩沖液（pH7.4）

磷酸二氫鉀        0.2g

磷酸氫二鈉        2.90g

氯化鈉            8g

加去離子水定容到1000ml。

2洗滌緩沖液（pH7.4   0.15mol/L）   《激素酶免疫測定技術》石老師編著

0.05%Tween-20       0.5ml

加在PBS緩沖液1000ml中。

PBS緩沖液：

　　　　　　KH₂PO₄ 　　         0.2g

　　　　　　Na₂HPO₄·12H₂O　　  2.9g

　　　　　　NaCl　 　            8.0g

　　　　　　KCl　　             0.2g

　　　　加蒸餾水至1000ml。

3測定緩沖液（Ph7.0  含0.87﹪NaCl 和0.1﹪BSA的0.1M磷酸緩沖液）用于標準孕酮，孕酮酶標物及奶樣的稀釋。   《激素酶免疫測定技術》石老師編著

        Na₂HPO₄·12H₂O    21.85g

         NaH₂PO₄·2H₂O      6.08g

         NaCl               8.70g

BSA               1.00g

溶于1000mL蒸餾水中

4封閉緩沖液

牛血清白蛋白（BSA）   2%    2g

　　　　　　（或5%脫脂奶粉）加洗滌緩沖液100 ml。

0.05mol/L碳酸鹽緩沖液（pH9.6）+2.0%BSA

2.0gBSA加配好的0.05mol/L碳酸鹽緩沖液溶解定量至100ml

5底物緩沖液（pH5.4）磷酸鹽-檸檬酸緩沖液

     0.2M  Na₂HPO₄（無水28.4g/L，帶12結晶水71.7g/L） 取25.7ml

　　 0.1M  檸檬酸（無水19.2g/L，帶1結晶水21.01g/L）   取24.3ml

　加蒸餾水至100ml。

或

檸檬酸（C6H8O7·H₂O）    0.47g

Na₂HPO₄·12H₂O               2.00g

6（1） TMB（四甲基聯苯胺）顯色液（藍色）

A液（3，3’，5，5’-四甲基聯苯胺，TMB）:稱取TMB20mg溶于10ml無水乙醇中，*溶解后，加雙蒸水至100ml。

B液（0.1mol/L檸檬酸-0.2mol/L磷酸氫二鈉緩沖液，pH5.0-5.4）:稱取Na₂HPO₄·12H₂O14.34g，檸檬酸1.87g溶于180ml雙蒸水，加0.75%過氧化氫尿素1.28ml，定容至200ml，調pH至5.0-5.4。

將A液和B液按1：l混合后即成TMB-過氧化氫尿素應用液

或

TMB（2mg/ml水）          0.05ml

　　　　    底物緩沖液      　　　   0.95ml

　　　　    30%  H₂O₂　　 　       0.001ml

            總體積1ml。

（2）OPD（鄰苯二胺）顯色液（黃棕色）（現配避光）

  OPD（干粉）             0.004g

  底物緩沖液                10ml

  30%  H₂O₂                    0.015ml

 總體積10ml。

（3）TMBS底物液（用于顯色）  《激素酶免疫測定技術》石老師編著

10mg四甲基聯苯胺硫酸鹽（TMBS）的二甲基亞砜溶液，用底物緩沖液配成0.2mg/ml的TMBS底物液。用前加H2O2溶液30﹪左右。

7  終止液  2mol/LH2SO4   用于終止反應

　在178.3ml水中，逐滴加入濃硫酸（18M，約98%）21.7ml，邊加邊搖。（濃H2SO4：蒸餾水=1:9）

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